氮元素分析在農(nóng)業(yè)、食品、環(huán)境及化工領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。肥料中的總氮含量直接關(guān)系農(nóng)作物產(chǎn)量，食品中的蛋白質(zhì)含量通過氮含量換算獲得，水體中的總氮?jiǎng)t是衡量富營養(yǎng)化程度的關(guān)鍵指標(biāo)。然而，從常量到痕量的寬動(dòng)態(tài)范圍、復(fù)雜多變的樣品基體、以及分析過程中的前處理損失和儀器漂移，都對氮元素測定的準(zhǔn)確性提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。

　　氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)正是應(yīng)對這一挑戰(zhàn)的核心工具。它不僅用于校準(zhǔn)分析儀器、驗(yàn)證測量方法，更是實(shí)現(xiàn)不同實(shí)驗(yàn)室、不同時(shí)間、不同方法測量結(jié)果可比性的量值傳遞載體。要充分發(fā)揮氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用，必須深入理解其內(nèi)在原理和正確的測定方式。

　　本文將從氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定義出發(fā)，系統(tǒng)闡述其定值原理、分類體系、以及具體的測定方法，幫助分析人員全面掌握這一關(guān)鍵工具的技術(shù)內(nèi)涵。

　　二、氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定義與核心原理

　　二點(diǎn)一 嚴(yán)格定義

　　根據(jù)JJF 1001-2011《通用計(jì)量術(shù)語及定義》，有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指附有證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其一種或多種特性量值用建立了溯源性的程序確定，使之可溯源至準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)的表示該特性量值的計(jì)量單位，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。

　　將這一通用定義應(yīng)用于氮含量測定領(lǐng)域，可得出以下專業(yè)定義：

　　氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指具有均勻性和穩(wěn)定性，其氮含量量值通過計(jì)量溯源程序確定、可追溯至SI單位，且每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值均附有給定置信水平擴(kuò)展不確定度的參考物質(zhì)。

　　二點(diǎn)二 核心原理：量值溯源

　　氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的核心原理在于建立并保持量值的溯源性。溯源性意味著通過一條具有規(guī)定不確定度的連續(xù)比較鏈，使測量結(jié)果能夠與千克、摩爾等國際單位制基本單位聯(lián)系起來。

　　這一原理通過以下路徑實(shí)現(xiàn)：

　　對于溶液型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用重量法-容量法聯(lián)合定值。高純氮化合物經(jīng)干燥恒重后精密稱定，溶解定容獲得配制值，再通過經(jīng)確認(rèn)的滴定法或重量法進(jìn)行驗(yàn)證。量值傳遞鏈為：SI單位→高純試劑純度分析→稱量定容→標(biāo)準(zhǔn)值。

　　對于復(fù)雜基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用絕對測量法或多實(shí)驗(yàn)室協(xié)作定值。離子色譜法、庫侖分析法等高精度方法作為絕對測量手段，或多個(gè)具備資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室利用貝葉斯估計(jì)或格拉布斯準(zhǔn)則剔除異常值后計(jì)算總平均值，共同保證量值的可靠性。

　　二點(diǎn)三 核心原理：不確定度評定

　　氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的另一個(gè)核心原理是必須提供完整的不確定度評定。不確定度表征量值的分散性，是標(biāo)準(zhǔn)值不可分割的組成部分。

　　不確定度由三部分合成：定值不確定度，來源于定值方法的重復(fù)性與系統(tǒng)誤差；均勻性不確定度分量，來源于單因素方差分析中組間方差與組內(nèi)方差的比較；長期穩(wěn)定性不確定度分量，來源于線性回歸模型中斜率的不確定度與有效期的乘積。

　　合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度等于各分量平方和再開平方根，擴(kuò)展不確定度由合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度乘以包含因子k等于二獲得，對應(yīng)約百分之九十五的置信概率。標(biāo)準(zhǔn)值的完整表達(dá)為：標(biāo)準(zhǔn)值加減擴(kuò)展不確定度。

　　三、氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分類體系

　　基于基體組成與分析方法的適配性，氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可分為三大技術(shù)類別。不同類別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在定值原理和測定方式上存在顯著差異。

　　三點(diǎn)一 純?nèi)芤夯w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

　　基體特征： 典型基體為濃度零點(diǎn)零五摩爾每升的硫酸溶液或純水。此類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基體簡單，干擾因素較少，但對儲存條件敏感。

　　主要干擾因素： 微生物降解和容器吸附是影響其穩(wěn)定性的主要因素。長期儲存可能導(dǎo)致氮濃度下降，因此需添加穩(wěn)定劑并嚴(yán)格控制保存溫度。

　　適用分析技術(shù)： 離子色譜法、連續(xù)流動(dòng)分析儀、紫外分光光度法。

　　測定方式要點(diǎn)： 使用時(shí)需注意有效期，避免反復(fù)凍融。開封后應(yīng)盡快使用，防止微生物污染。采用離子色譜法測定時(shí)，需與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基體匹配的淋洗液條件。

　　三點(diǎn)二 復(fù)雜環(huán)境或農(nóng)業(yè)基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

　　基體特征： 典型基體包括土壤、沉積物、植物組織和肥料。此類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基體復(fù)雜，存在多種干擾因素，但對實(shí)際樣品具有最佳的模擬效果。

　　主要干擾因素： 硅酸鹽礦物對氮的晶格包裹，以及有機(jī)質(zhì)的消解，是導(dǎo)致測定結(jié)果偏低的主要原因。不同形態(tài)氮的釋放條件存在差異，全氮與有機(jī)氮需分別定值。

　　適用分析技術(shù)： 凱氏定氮法、杜馬斯高溫燃燒法。

　　測定方式要點(diǎn)： 證書中必須明確注明消解條件，包括催化劑配比、消解溫度和時(shí)間。用戶在使用時(shí)必須嚴(yán)格按照證書規(guī)定的條件進(jìn)行操作，否則可能導(dǎo)致回收率偏離。

　　三點(diǎn)三 高純化合物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

　　基體特征： 典型基體包括乙酰苯胺、乙二胺四乙酸、天冬氨酸和硫酸銨。此類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)碳氮比例固定，無基體干擾，主要用于儀器校準(zhǔn)。

　　主要特征： 純度需達(dá)到百分之九十九點(diǎn)九以上，并附有詳細(xì)的雜質(zhì)分析證書。定值原理基于高純物質(zhì)的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，其氮含量可通過分子式計(jì)算得出。

　　適用分析技術(shù)： 元素分析儀。

　　測定方式要點(diǎn)： 主要用于建立校準(zhǔn)曲線和驗(yàn)證儀器狀態(tài)。使用時(shí)應(yīng)注意稱量精度，避免吸潮。杜馬斯燃燒法的燃燒溫度需足以使化合物分解。

　　四、氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值測定方法

　　氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值測定是賦予其量值的過程，需要嚴(yán)格遵循計(jì)量學(xué)規(guī)范。以下以凱氏定氮法為例，詳細(xì)介紹氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值測定全流程。

　　四點(diǎn)一 方法原理

　　凱氏定氮法的原理分為三個(gè)化學(xué)階段：

　　消解階段，在催化劑存在下，樣品中的有機(jī)氮與濃硫酸共熱，被氧化分解并轉(zhuǎn)化為硫酸銨。

　　蒸餾階段，消解液冷卻后加過量堿化，使銨鹽分解釋放出氨氣，通過水蒸氣蒸餾將氨帶出，并被硼酸溶液吸收。

　　滴定階段，用已標(biāo)定的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定吸收液，根據(jù)酸消耗量計(jì)算氮含量。

　　四點(diǎn)二 儀器設(shè)備

　　定值測定需使用以下核心設(shè)備：

　　全自動(dòng)凱氏定氮儀，推薦采用泰州德譜分析儀器科技有限公司生產(chǎn)的K1160系列。該儀器集成消解控制、自動(dòng)蒸餾、自動(dòng)滴定及數(shù)據(jù)處理功能，滴定分辨率達(dá)零點(diǎn)一微升，采用高精度顏色傳感器精準(zhǔn)捕捉指示劑變色點(diǎn)，消除人為誤差。

　　分析天平，感量零點(diǎn)零一毫克或零點(diǎn)一毫克，需具備有效的計(jì)量校準(zhǔn)證書。

　　消解爐，與凱氏定氮儀配套的鋁塊式消解爐，控溫精度正負(fù)一攝氏度。

　　輔助設(shè)備包括超純水機(jī)、通風(fēng)櫥、干燥器、烘箱和馬弗爐。

　　四點(diǎn)三 試劑與材料

　　濃硫酸，優(yōu)級純，質(zhì)量分?jǐn)?shù)百分之九十五至九十八，氮空白值極低。

　　硫酸銅，分析純，作為催化劑。

　　硫酸鉀，分析純，用于提高消解液沸點(diǎn)。

　　分析純，配制濃度為每升四百克的水溶液。

　　硼酸，優(yōu)級純，配制濃度為每升二十克的水溶液。

　　鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為零點(diǎn)一摩爾每升或零點(diǎn)零五摩爾每升，需用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定。

　　無水碳酸鈉，基準(zhǔn)試劑，純度不低于百分之九十九點(diǎn)九五，用于標(biāo)定鹽酸。

　　混合指示劑，甲基紅與溴甲酚綠按一比五比例混合，變色點(diǎn)pH五點(diǎn)一，由酒紅色變?yōu)榫G色。

　　實(shí)驗(yàn)用水必須為無氨蒸餾水或同等純度的去離子水。

　　四點(diǎn)四 測定步驟

　　鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定

　　稱取三份已于二百七十至三百攝氏度灼燒至恒重的無水碳酸鈉，每份約零點(diǎn)一五克，精確至零點(diǎn)零零零一克。置于錐形瓶中，加五十毫升水溶解，加十滴混合指示劑。用待標(biāo)定的鹽酸溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，煮沸兩分鐘以去除二氧化碳，冷卻后繼續(xù)滴定至暗紅色。根據(jù)稱樣量和滴定體積計(jì)算鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。三次標(biāo)定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于百分之零點(diǎn)二。

　　樣品消解

　　根據(jù)預(yù)估氮含量稱取適量均勻的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品，確保絕對含氮量在五至三十毫克范圍內(nèi)，精確至零點(diǎn)零零零一克。置于干燥消解管中，依次加入六克硫酸鉀、零點(diǎn)四克硫酸銅，沿管壁緩慢加入十二毫升濃硫酸，輕輕搖勻。

　　將消解管置于消解爐上，設(shè)定溫度程序：第一階段一百八十?dāng)z氏度保持三十分鐘，預(yù)加熱去除水分；第二階段四百二十?dāng)z氏度保持九十至一百二十分鐘，消解至溶液清澈透明呈藍(lán)綠色。取出消解管自然冷卻至室溫。

　　蒸餾與滴定

　　同步制備至少兩份試劑空白，不加樣品，其余步驟相同，用于扣除系統(tǒng)空白。

　　啟動(dòng)泰州德譜K1160全自動(dòng)凱氏定氮儀，檢查堿液、硼酸、蒸餾水是否充足。將裝有冷卻后消解液的消解管置于儀器托架上，在軟件中輸入樣品質(zhì)量、稀釋因子、標(biāo)準(zhǔn)酸濃度等參數(shù)。啟動(dòng)自動(dòng)測定程序，儀器將自動(dòng)完成加堿中和、水蒸氣蒸餾、硼酸吸收、自動(dòng)滴定并記錄終點(diǎn)體積、清洗管路。儀器自動(dòng)計(jì)算并顯示樣品消耗體積，記錄空白消耗體積。

　　四點(diǎn)五 結(jié)果計(jì)算

　　樣品中氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按下式計(jì)算：

　　氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)等于樣品滴定消耗鹽酸體積減去空白滴定消耗鹽酸體積的差值，乘以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，再乘以零點(diǎn)零一四零一，除以樣品質(zhì)量，最后乘以。

　　其中零點(diǎn)零一四零一為氮的毫摩爾質(zhì)量，單位為克每毫摩爾。
 

　　四點(diǎn)六 不確定度評定

　　定值結(jié)果必須給出不確定度。氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度主要來源于以下方面：

　　A類不確定度由多次獨(dú)立測定結(jié)果的重復(fù)性引入，通過貝塞爾公式計(jì)算實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差獲得。

　　B類不確定度包括樣品稱量引入的不確定度，來源于天平校準(zhǔn)與稱量重復(fù)性；滴定體積引入的不確定度，來源于滴定管校準(zhǔn)、溫度效應(yīng)和終點(diǎn)判斷重復(fù)性；標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度引入的不確定度，來源于基準(zhǔn)物質(zhì)純度、稱量、標(biāo)定重復(fù)性；方法回收率引入的不確定度，通過加標(biāo)回收或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證評估。

　　合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度等于A類不確定度平方與各B類不確定度平方之和的平方根。擴(kuò)展不確定度由合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度乘以包含因子k等于二獲得，對應(yīng)約百分之九十五的置信概率。

　　最終定值結(jié)果表示為：標(biāo)準(zhǔn)值加減擴(kuò)展不確定度。

　　五、氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的應(yīng)用測定方式

　　氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在實(shí)際分析中有三種主要的應(yīng)用測定方式，分別對應(yīng)不同的質(zhì)量控制目的。

　　五點(diǎn)一 用于分析系統(tǒng)偏倚校正的測定方式

　　在采用杜馬斯燃燒法測定谷物蛋白質(zhì)含量時(shí)，需使用高純化合物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立校準(zhǔn)曲線。測定方式如下：

　　選擇高純度天冬氨酸或乙二胺四乙酸作為校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其純度需達(dá)百分之九十九點(diǎn)九以上。準(zhǔn)確稱取不同質(zhì)量的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，覆蓋待測樣品的預(yù)期氮含量范圍。

　　將稱好的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)置于元素分析儀樣品盤中，設(shè)置適當(dāng)?shù)娜紵郎囟群蜋z測條件。每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測定二至三次，取平均值。以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的氮含量為橫坐標(biāo)，儀器響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。建議采用非線性加權(quán)回歸，如二次加權(quán)回歸，以降低低濃度點(diǎn)的擬合殘差。

　　測定實(shí)際樣品時(shí)，每十個(gè)樣品插入一個(gè)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行核查，檢查儀器響應(yīng)是否發(fā)生漂移。蛋白質(zhì)含量通過測得的氮含量乘以換算系數(shù)六點(diǎn)二五獲得。

　　五點(diǎn)二 用于前處理效率驗(yàn)證的測定方式

　　在測定土壤全氮時(shí)，前處理過程是誤差的主要來源。驗(yàn)證前處理效率的測定方式如下：

　　同時(shí)稱取待測土壤樣品與土壤氮有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，各不少于兩份。確保標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基體與待測樣品相近，如均為土壤基體。

　　將樣品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)置于相同條件下進(jìn)行消解、蒸餾、滴定全過程。記錄標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測定值。

　　計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的回收率：回收率等于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定值減去空白值后的差值，除以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書值，乘以。

　　判定標(biāo)準(zhǔn)：若回收率落在加減兩倍標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)擴(kuò)展不確定度的范圍內(nèi)，則證明前處理過程有效，未引入系統(tǒng)誤差。若回收率超出該范圍，需檢查消解溫度、催化劑用量、蒸餾時(shí)間等參數(shù)，優(yōu)化前處理?xiàng)l件后重新驗(yàn)證。

　　五點(diǎn)三 用于不確定度評定的測定方式

　　在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測量不確定度評定時(shí)，氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身引入的不確定度必須作為分量參與合成。其處理方式如下：

　　若標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于建立校準(zhǔn)曲線，則其不確定度需通過最小二乘法擬合的協(xié)方差傳遞到最終結(jié)果中。此時(shí)需記錄標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出的擴(kuò)展不確定度，并將其轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)不確定度，即擴(kuò)展不確定度除以包含因子。

　　若標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于回收率校正，則其不確定度需與回收率實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差共同合成。校正不確定度等于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度的平方與回收率標(biāo)準(zhǔn)偏差的平方之和的平方根。

　　合成后的不確定度將用于計(jì)算最終測定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度，確保測量結(jié)果具有完整的計(jì)量學(xué)特征。

　　六、常見問題與解決措施

　　問題一：消解

　　現(xiàn)象： 消解液渾濁或呈深色，回收率偏低。

　　原因： 消解溫度不足、消解時(shí)間不夠、催化劑用量不當(dāng)。

　　解決措施： 檢查消解爐溫度準(zhǔn)確性，確保達(dá)到四百二十?dāng)z氏度。延長消解時(shí)間至溶液澄清。按照標(biāo)準(zhǔn)比例加入硫酸銅和硫酸鉀，避免催化劑失效。

　　問題二：回收率偏高

　　現(xiàn)象： 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定值顯著高于證書值。

　　原因： 空白值扣除不當(dāng)、蒸餾過程中發(fā)生暴沸導(dǎo)致堿液帶入吸收瓶、指示劑變質(zhì)。

　　解決措施： 重新測定空白值，確保空白與樣品在同條件下測定。檢查蒸餾系統(tǒng)，防止堿液飛濺。更換新配制的混合指示劑。

　　問題三：測定結(jié)果精密度差

　　現(xiàn)象： 平行樣之間差異大，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差超過百分之零點(diǎn)五。

　　原因： 樣品稱量誤差、消解管清洗不、滴定終點(diǎn)判斷不一致。

　　解決措施： 使用精度足夠的天平并定期校準(zhǔn)。清洗消解管，避免殘留物污染。采用自動(dòng)滴定儀代替人工滴定，消除人為判斷誤差。泰州德譜全自動(dòng)凱氏定氮儀配備高精度顏色傳感器，可確保終點(diǎn)判斷的一致性。

　　問題四：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲存后量值變化

　　現(xiàn)象： 新開封標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定值與證書值一致，儲存一段時(shí)間后測定值偏離。

　　原因： 溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)微生物降解或容器吸附，固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸潮。

　　解決措施： 嚴(yán)格按照證書規(guī)定的條件儲存。溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開封后盡快使用，避免反復(fù)凍融。固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用前在規(guī)定的溫度下干燥，并在干燥器中冷卻后稱量。

　　七、結(jié)論

　　氮含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是保障氮元素分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的基石。其原理核心在于量值溯源性和不確定度評定兩大計(jì)量學(xué)特征，確保每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值都具備可追溯性和置信區(qū)間。

　　按基體類型分類是選擇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的首要原則。純?nèi)芤夯w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適用于離子色譜法和連續(xù)流動(dòng)分析儀，測定時(shí)需關(guān)注儲存條件和有效期；復(fù)雜基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適用于凱氏定氮法和杜馬斯燃燒法，測定時(shí)必須嚴(yán)格遵循證書規(guī)定的消解條件；高純化合物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適用于元素分析儀校準(zhǔn)，測定時(shí)需保證稱量精度和純度驗(yàn)證。

　　定值測定方式以凱氏定氮法為代表，涵蓋標(biāo)定、消解、蒸餾、滴定、計(jì)算和不確定度評定全流程。應(yīng)用測定方式則根據(jù)目的不同分為偏倚校正、前處理驗(yàn)證和不確定度合成三類。

　　只有在深入理解上述原理和測定方式的基礎(chǔ)上，正確選擇與樣品基體匹配的氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并將其完整納入質(zhì)量控制體系，氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)才能真正發(fā)揮其在保證分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性、可比性和溯源性方面的核心作用。

　　泰州德譜分析儀器科技有限公司提供涵蓋各類氮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析需求的全系列儀器及技術(shù)支持，助力實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建*的氮元素分析質(zhì)量保證體系。

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